የግራም ቀለም መቀባት ፈጣን ቴክኒክ ሲሆን በቲሹ ናሙና ውስጥ የባክቴሪያዎችን መኖር ለማየት እና በሴል ግድግዳዎቻቸው ኬሚካላዊ እና አካላዊ ባህሪዎች ላይ በመመርኮዝ ባክቴሪያዎችን እንደ ግራም-አዎንታዊ ወይም ግራም-አሉታዊ ለመከፋፈል ያገለግላል። የግራም ነጠብጣብ ሁልጊዜ ማለት ይቻላል የባክቴሪያ በሽታን ለመመርመር እንደ መጀመሪያው እርምጃ ያገለግላል።
ይህ የማቅለም ዘዴ የተሰየመው በዴንማርክ ሳይንቲስት ሃንስ ክርስትያን ግራም (1853 - 1938) ሲሆን ፣ ቴክኒኩን በ 1882 ያዘጋጀው እና በ 1884 ተመሳሳይ ክሊኒካዊ ምልክቶች ባላቸው ሁለት የባክቴሪያ ዓይነቶች መካከል የመለየት ዘዴ ነው - Streptococcus pneumoniae (እንዲሁም በመባልም ይታወቃል) Streptococcus pneumoniae). Pneumococci) እና ባክቴሪያ Klebsiella pneumoniae።
ደረጃ
ዘዴ 1 ከ 3 - ማይክሮስኮፕ ስላይድን ማዘጋጀት
ደረጃ 1. በቤተ ሙከራ ውስጥ ለመሥራት ይዘጋጁ።
እርስዎ የሚሞከሩት ናሙና የባክቴሪያ ብክለትን ለመከላከል ጓንት እና ረዥም የፀጉር ማሰሪያ ያድርጉ። በጢስ ማውጫ ስር ወይም በሌላ በደንብ በሚተነፍስ አካባቢ የሥራ ቦታውን ያፅዱ። የቡንሰንን በርነር ይፈትሹ እና ከመጀመርዎ በፊት ማይክሮስኮፕ በትክክል መስራቱን ያረጋግጡ።
ደረጃ 2. የአጉሊ መነጽር መስታወት ተንሸራታች ማድረቅ።
የመስታወቱ ተንሸራታች የቆሸሸ ከሆነ ዘይት እና ቆሻሻን ለማስወገድ በሳሙና ውሃ ይታጠቡ። ተንሸራታቹን በኤታኖል ፣ በመስታወት ማጽጃ ወይም በቤተ ሙከራዎ በተጠቀመበት ሌላ ዘዴ ያፅዱ።
ደረጃ 3. ናሙናውን በመስታወት ተንሸራታች ላይ ያድርጉት።
በሕክምና ናሙና ውስጥ ባክቴሪያዎችን ወይም በፔትሪ ምግብ ውስጥ የሚያድጉ የባክቴሪያዎችን ባህል ለመለየት የግራም እድልን ቴክኒክ መጠቀም ይችላሉ። ለተሻለ ውጤት ፣ ናሙናው በቀጭኑ ጭረቶች ላይ የግራም እድልን ይጠቀሙ። በዕድሜ የገፉ ባክቴሪያዎች የሕዋስ ግድግዳዎቻቸውን ሊጎዱ እና ለግራም ቀለም ምላሽ ላይሰጡ ስለሚችሉ ዕድሜያቸው ከ 24 ሰዓታት በታች የሆኑ ናሙናዎችን መጠቀም ተገቢ ነው።
- የሕብረ ህዋስ ናሙና የሚጠቀሙ ከሆነ 1-2 ጠብታዎች ወደ መስታወት ስላይድ ይጨምሩ። የሌላ የጸዳ መስታወት ተንሸራታች ጠርዝን በመጠቀም በማንሸራተት ቀጭን የናሙና መርጨት ንብርብር ለመፍጠር በተንሸራታች ላይ በእኩል ያሰራጩ። የሚቀጥለውን እርምጃ ከማድረጉ በፊት እንዲደርቅ ያድርጉት።
- ባክቴሪያዎችን ከፔትሪ ምግብ እየወሰዱ ከሆነ ፣ እስኪበራ ድረስ በቡንሰን በርነር ውስጥ የክትባቱን ዑደት ያጥቡት ፣ ከዚያ እንዲቀዘቅዝ ይፍቀዱለት። አነስተኛውን የባክቴሪያ ናሙና ለመሰብሰብ ከመጠቀምዎ በፊት ንፁህ ውሃ በተንሸራታች ላይ ለማንጠባጠብ loop ን ይጠቀሙ ፣ ከዚያ ያፅዱ እና እንደገና ያቀዘቅዙ። ከዚያ በኋላ ቀስ ብለው ቀስቅሰው።
- በሾርባው ውስጥ የተዘጋጁት ተህዋሲያን አዙሪት በመጠቀም እንደገና መነቃቃት አለባቸው ፣ ከዚያም ውሃ ሳይጨምር ከላይ ባለው የክትባት ዑደት ይወሰዳሉ።
- የመዋኛ ናሙና ካለዎት (ብዙውን ጊዜ በትንሽ ጥጥ በተጠቆመ እጀታ ይከናወናል) ፣ መንሸራተቻው ላይ መንጠቆውን ይንኩ እና በቀስታ ያሽከርክሩ።
ደረጃ 4. ትንሽ ከፍ ያለ ሙቀት ጥሩ ስሚር ማድረግ ይችላል።
ሙቀቱ ተህዋሲያን በተንሸራታች አናት ላይ ይይዛል ፣ ስለሆነም በቆሸሸ ሂደት ውስጥ በቀላሉ አይሟሟሉም። በቦንሰን ማቃጠያ ላይ ተንሸራታቹን በፍጥነት ከሁለት እስከ ሶስት ጊዜ መታ ያድርጉ ፣ ወይም ተንሸራታቹን በኤሌክትሪክ ተንሸራታች ማሞቂያ ላይ ያሞቁ። ከመጠን በላይ አይሞቁ ፣ ናሙናው ሊጎዳ ይችላል። የቡንሰን በርነር እየተጠቀሙ ከሆነ ፣ ከትልቅ ብርቱካናማ ነበልባል ይልቅ ትንሽ ግን ሰማያዊ ነበልባል መሆን አለበት።
በአማራጭ ፣ ስሚር እንዲሁ ከሜታኖል ጋር ሊደረግ ይችላል ፣ 1-2 የሜታኖልን ጠብታዎች ወደ ደረቅ ስሚር በመጨመር ፣ ቀሪውን ሚታኖልን በተንሸራታች ላይ በማድረቅ ክፍት አየር ውስጥ በመተው። ይህ ዘዴ የሕዋስ ጉዳትን ይቀንሳል እና ንጹህ የስላይድ ምስል ዳራ ይሰጣል።
ደረጃ 5. ተንሸራታቹን በቀለም ትሪው ላይ ያድርጉት።
የማቅለሚያ ትሪዎች ከብረት ፣ ከመስታወት ወይም ከዝቅተኛ የፕላስቲክ ሳህኖች ከላይ ለስላሳ ሽፋን ባለው ሽፋን የተሠሩ ናቸው። የሚጠቀሙት ፈሳሽ ወደ ትሪው ውስጥ እንዲገባ ተንሸራታቹን በእነዚህ መረቦች ላይ ያስቀምጡ።
ባለቀለም ትሪ ከሌለዎት የበረዶ ቅንጣቶችን ለማተም በፕላስቲክ ትሪ ላይ ስላይድ ማድረግ ይችላሉ።
ዘዴ 2 ከ 3 - የግራም ቆሻሻ ሂደት
ደረጃ 1. በስሜር ላይ ክሪስታል ቫዮሌት ፈሳሽ አፍስሱ።
የጄንቴን ቫዮሌት በመባል በሚታወቀው ጥቂት ጠብታዎች ክሪስታል ቫዮሌት ቀለም የባክቴሪያ ናሙና ለመርጨት ፒፔት ይጠቀሙ። ለ 30-60 ሰከንዶች ይተውት። ክሪስታል ቫዮሌት (KV) በውሃ መፍትሄ ወደ KV+ እና ክሎራይድ (ክሊ- ions) ይለያል። እነዚህ ion ዎች ወደ ግራም-አወንታዊ እና ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች የሕዋስ ግድግዳዎች እና የሕዋስ ሽፋን ዘልቀው ይገባሉ። የ KV+ ion ከባክቴሪያ ሕዋሳት አሉታዊ በሆነ ሁኔታ ከተከሰሱ አካላት ጋር መስተጋብር ይፈጥራል ፣ ህዋሶቹ ሐምራዊ ቀለም ይሰጣቸዋል።
ብዙ ላቦራቶሪዎች ዝናብን ለመከላከል የአሞኒየም ኦክሳይድን የያዘውን “ሁክከር” ክሪስታል ቫዮሌት ይጠቀማሉ።
ደረጃ 2. ክሪስታል ቫዮሌት በቀስታ ያጠቡ።
ተንሸራታቹን ያጥፉ እና ተንሸራታች ላይ ትንሽ የተፋሰሰ ወይም የቧንቧ ውሃ ለማጠጫ ማጠቢያ ጠርሙስ ይጠቀሙ። ውሃ በስሜር ወለል ላይ መፍሰስ አለበት ፣ እና በቀጥታ በስሜር ላይ መርጨት የለበትም። ከመጠን በላይ አይጠቡ። በ gram አዎንታዊ ባክቴሪያዎች ውስጥ ቆሻሻን ማስወገድ ይችላል።
ደረጃ 3. ቅባቱን በአዮዲን ያጠቡ ፣ ከዚያ ያጥቡት።
ቅባቱን በአዮዲን ለማጥለቅ ጠብታ ይጠቀሙ። ቢያንስ ለ 60 ሰከንዶች ያህል ይተዉት ፣ ከዚያ ከላይ በተጠቀሰው ተመሳሳይ መንገድ በጥንቃቄ ያጥቡት። አዮዲን በአሉታዊ ክስ ion መልክ ከ KV+ ጋር በመገናኘት በክሪስታል ቫዮሌት እና በአዮዲን (CV-I ውህደት ውስብስብ) መካከል) በሴሉ ውስጣዊ እና ውጫዊ ንብርብሮች ውስጥ። ይህ ውስብስብ ውህዶች በቆሸሸ ሥፍራዎች ውስጥ በክሪስታል ቫዮሌት ውስጥ የቫዮሌት ቀለምን ይይዛሉ።
አዮዲን የተበላሸ ንጥረ ነገር ነው። ከመተንፈስ ፣ ከመጠጣት ወይም ከቆዳ ጋር ንክኪን ያስወግዱ።
ደረጃ 4. የቀለም ማጽጃን ይጨምሩ ፣ ከዚያ በፍጥነት ያጥቡት።
1: 1 የአሴቶን እና የኢታኖል ድብልቅ ለዚህ አስፈላጊ እርምጃ ብዙውን ጊዜ ጥቅም ላይ ይውላል ፣ ይህም በጥንቃቄ ጊዜ ሊሰጠው ይገባል። ለማንሸራተት በተጠቀመው ውሃ ውስጥ ሐምራዊ እስካልታየ ድረስ ተንሸራታቹን በተወሰነ ማእዘን ላይ ያድርጉት ፣ ከዚያ የቀለም ብሌን ይጨምሩ። ብሌሽቱ ከፍተኛ የአሴቶን መጠን ከያዘ ይህ ብዙውን ጊዜ ከ 10 ሰከንዶች በታች ወይም አልፎ አልፎም ይወስዳል። ይህንን እርምጃ ወዲያውኑ ያቁሙ ፣ አለበለዚያ ማቅለሙ ከግሪም-አዎንታዊ እና ከአሉታዊ ህዋሶች ውስጥ ክሪስታል ቫዮሌት ያጥባል ፣ እና የማቅለም ሂደት መደጋገም አለበት። ያለፈውን ቴክኒክ በመጠቀም ማንኛውንም ከመጠን በላይ የቀለም ብሌን ወዲያውኑ ያጥቡት።
- ንፁህ አሴቶን (95%+) እንደ ምትክ ሆኖ ሊያገለግል ይችላል። ብዙ acetone ን በተጠቀሙ ቁጥር ብሉቱ በፍጥነት ይሠራል ስለዚህ ለጊዜው የበለጠ ትኩረት መስጠት አለብዎት።
- ለዚህ ደረጃ ጊዜውን ለመከታተል የሚቸገሩ ከሆነ ፣ የቀለም ጠብታ ጠብታ ጠብታ ይጨምሩ።
ደረጃ 5. ፀረ-ቀለምን በስሜር ላይ ይረጩ ፣ ከዚያ ያጥቡት።
አጸፋዊ ነጠብጣብ ፣ ብዙውን ጊዜ ሳፋራኒን ወይም ፉችሲን ፣ በጌት-አሉታዊ እና ግራም-አወንታዊ ባክቴሪያዎች መካከል ያለውን ንፅፅር ለመጨመር ጥቅም ላይ ይውላል ፣ ያጌጡ (ያጌጡ) ባክቴሪያዎችን ፣ ማለትም ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያ ፣ ሮዝ ወይም ቀይ። ቢያንስ ለ 45 ሰከንዶች ይውጡ ፣ ከዚያ ያጠቡ።
ፉችሲን እንደ ሄሞፊለስ spp እና Legionella spp ያሉ ብዙ ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎችን በከፍተኛ ሁኔታ ያረክሳል። ይህ ዘዴ ለጀማሪዎች ጥሩ ነው።
ደረጃ 6. ተንሸራታቹን ማድረቅ።
ለማድረቅ ክፍት አየር ውስጥ ሊያደርቋቸው ወይም ለዚሁ ዓላማ በተሸጠው መጽሐፍ ቅዱሳዊ ወረቀት ማድረቅ ይችላሉ።
ዘዴ 3 ከ 3 - የቀለም ውጤቶችን በመፈተሽ ላይ
ደረጃ 1. የብርሃን ማይክሮስኮፕን ያዘጋጁ።
ተንሸራታቹን በአጉሊ መነጽር ስር ያድርጉት። ተህዋሲያን በከፍተኛ መጠን ይለያያሉ ፣ ስለዚህ የሚፈለገው አጠቃላይ ማጉላት ከ 400x እስከ 1000x ይለያያል። ከመጥመቂያ ዘይት ጋር ያለው ተጨባጭ ሌንስ ለጠለፋ ምስል ይመከራል። አረፋዎች እንዳይፈጠሩ በሚንጠባጠብበት ጊዜ እንቅስቃሴን በማስቀረት የመጥመቂያውን ዘይት ወደ ተንሸራታቱ ላይ ይጥሉት። ተጨባጭ ሌንስ ወደ ቦታው እንዲገባ እና ዘይቱን እንዲነካ ማይክሮስኮፕ ሌንስ መያዣውን ያንቀሳቅሱ።
ዘይት መጥለቅ በ “ደረቅ” ሌንሶች ላይ ሳይሆን በልዩ ሁኔታ የተነደፉ ሌንሶች ላይ ብቻ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።
ደረጃ 2. ግራም አዎንታዊ እና ግራም አሉታዊ ባክቴሪያዎችን ለመለየት ይሞክሩ።
በብርሃን ማይክሮስኮፕ ስር ተንሸራታቹን ይመርምሩ። ግራም-አዎንታዊ ባክቴሪያዎች ሐምራዊ ቀለም አላቸው ፣ ምክንያቱም ክሪስታል ቫዮሌት በወፍራም ህዋስ ግድግዳ ውስጥ ተይ is ል። ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች ሮዝ ወይም ቀይ ቀለም ይኖራቸዋል ፣ ምክንያቱም ክሪስታል ቫዮሌት በቀጭኑ የሕዋስ ግድግዳዎች በኩል ስለሚታጠብ ፣ ሮዝ ተቃራኒ-ቀለም በሚገባበት።
- ናሙናው በጣም ወፍራም ከሆነ ውጤቱ የውሸት አዎንታዊ ሊሆን ይችላል። ውጤቱ ትክክል መሆኑን ለማረጋገጥ ሁሉንም ግራም አዎንታዊ ባክቴሪያዎችን ካሳየ አዲስ ናሙና ይለጥፉ።
- በጣም ብዙ የቀለም ማጽጃን ከተጠቀሙ ውጤቱ የውሸት አሉታዊ ሊሆን ይችላል። ውጤቱ ትክክል መሆኑን ለማረጋገጥ ሁሉንም ግራም አሉታዊ ባክቴሪያዎችን ካሳየ አዲስ ናሙና ይለጥፉ።
ደረጃ 3. የሚያዩዋቸውን ውጤቶች ከማጣቀሻ ምስል ጋር ያወዳድሩ።
ተህዋሲያን ምን እንደሚመስሉ ካላወቁ ብዙውን ጊዜ በቅርጽ እና በግራም ነጠብጣብ የተደረደሩ የማጣቀሻ ምስሎችን ስብስብ ያጠኑ። እንዲሁም [National National Microbial Pathogen Database ፣ ባክቴሪያዎች በፎቶዎች እና በሌሎች በርካታ የመስመር ላይ ጣቢያዎች ላይ የመስመር ላይ የውሂብ ጎታዎችን ማየት ይችላሉ። መታወቂያን ለማመቻቸት ከዚህ በታች በተለምዶ የሚጋጠሙ ወይም ለመመርመር አስፈላጊ የሆኑ የባክቴሪያ ምሳሌዎች እንደ ግራም ሁኔታቸው እና ቅርፅቸው የተመደቡ ናቸው።
ደረጃ 4. በቅርጻቸው መሠረት ግራም-አወንታዊ ባክቴሪያዎችን ለይቶ ማወቅ።
ተህዋሲያን በአጉሊ መነጽር (ማይክሮስኮፕ) መሠረት እንደ ቅርፃቸው ተከፋፍለዋል ፣ ብዙውን ጊዜ እንደ ኮሲ (ሉላዊ) ወይም ዘንግ (ሲሊንደሪክ)። እንደ ቅርፃቸው አንዳንድ ግራም-አዎንታዊ ባክቴሪያ (ሐምራዊ ቀለም) አንዳንድ ምሳሌዎች እነሆ-
- ግራም አዎንታዊ ኮሲ ብዙውን ጊዜ staphylococci (የቡድን cocci ትርጉም) ወይም streptococci (ትርጉም ሰንሰለት cocci)።
- 'እንደ ባሲለስ ፣ ክሎስትሪዲየም ፣ ኮሪኔባክቴሪያ እና ሊስተርሲያ ያሉ ግራም አዎንታዊ ዘንጎች። ዘንግ ባክቴሪያ Actinomyces spp. ብዙውን ጊዜ ቅርንጫፎች ወይም ክር አላቸው።
ደረጃ 5. ግራም አሉታዊ ባክቴሪያዎችን መለየት።
ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች (ሮዝ ቀለም) ብዙውን ጊዜ በሦስት ቡድን ይመደባሉ። Cocci ሉላዊ ቅርፅ አላቸው ፣ ዘንጎች ረጅምና ቀጭን ናቸው ፣ የኮኮድ ዘንጎች በመካከላቸው ናቸው።
- ግራም አሉታዊ ኮኪ በጣም የተለመደው Neisseria spp ነው።
- ግራም-አሉታዊ ዘንጎች ለምሳሌ ኢ. ቪብሪዮ ኮሌራ እንደ መደበኛ ግንድ ወይም እንደታጠፈ ግንድ ሊታይ ይችላል።
- ግራም-አሉታዊ “ኮክኮይድ” (ወይም “ኮኮባካሊ”) ዘንግ ባክቴሪያ ለምሳሌ ቦርዴቴላ ፣ ብሩሴላ ፣ ሄሞፊለስ እና ፓስቲዩሬላ
ደረጃ 6. ውጤቶቹ ከተደባለቁ በጥንቃቄ ያረጋግጡ።
አንዳንድ ተህዋሲያን በሴል ግድግዳዎቻቸው ብስባሽ ወይም በሰም ተፈጥሮ ምክንያት በትክክል ለመሳል አስቸጋሪ ናቸው። እነዚህ ባክቴሪያዎች በአንድ ሕዋስ ውስጥ ፣ ወይም በአንድ ስሚር ውስጥ በተለያዩ ሕዋሳት መካከል ሐምራዊ ወይም ሮዝ ድብልቅን ሊያሳዩ ይችላሉ። ከ 24 ሰዓታት በላይ የቆዩ የባክቴሪያ ናሙናዎች ይህንን ችግር ሊያሳዩ ይችላሉ ፣ ግን በማንኛውም የናሙና ዕድሜ ላይ ቀለም ለመቀባት አስቸጋሪ የሆኑ አንዳንድ የባክቴሪያ ዝርያዎች አሉ። እነዚህ ተህዋሲያን እንደ አሲድ-ፈጣን ማቅለሚያ ፣ በባክቴሪያ ባህል ፣ በ TSI የባህል ሚዲያ ወይም በጄኔቲክ ምርመራ ለመመርመር የበለጠ ልዩ ምርመራዎችን ይፈልጋሉ።
- Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium, እና Propionibacterium spp. ሁሉም ግራም-አወንታዊ ባክቴሪያዎች ናቸው ፣ ግን ብዙውን ጊዜ በግልጽ አይቆሸሹም።
- እንደ Treponema ፣ Chlamydia እና Rickettsia spp ያሉ ትናንሽ ፣ ቀጭን ባክቴሪያዎች። በግራም ዘዴ ለመበከል አስቸጋሪ።
ደረጃ 7. የቀሩትን የፍጆታ ዕቃዎችን እና መሳሪያዎችን ያስወግዱ።
ይህ የቆሻሻ ማስወገጃ ሂደት በቤተ ሙከራዎች መካከል ይለያያል እና በተጠቀሱት ቁሳቁሶች ላይ የተመሠረተ ነው። በተለምዶ ፣ በቆሸሸ ትሪ ውስጥ ያለው ፈሳሽ እንደ አደገኛ ቆሻሻ በተሰየሙ ጠርሙሶች ውስጥ ይወገዳል። ስላይድ በ 10% በ bleach መፍትሄ ውስጥ ይንሸራተቱ ፣ ከዚያ በሹል መያዣ ውስጥ ያስወግዱ።
ጠቃሚ ምክሮች
- ያስታውሱ የግራም ቆሻሻ ውጤቶች ጥሩ የሚሆኑት ናሙናው ጥሩ ከሆነ ብቻ ነው። ጥሩ ናሙና እንዲያቀርቡ (ለምሳሌ የአክታ ናሙና ለማግኘት በጥልቅ ሳል እና በመትፋት መካከል ያለው ልዩነት) ለታካሚዎች ማሳወቅ አስፈላጊ ነው።
- እንደ ቀለም መቀባት ፣ ኤታኖል ከ acetone የበለጠ በዝግታ ምላሽ ይሰጣል።
- ደህንነትን ለማረጋገጥ መደበኛ የላቦራቶሪ ደንቦችን ያክብሩ።
- ለመለማመጃ ጉንጭ ማጠጫ ይጠቀሙ ፣ ምክንያቱም ሁለቱንም ግራም-አዎንታዊ እና ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎችን ይይዛል። አንድ ዓይነት ባክቴሪያ ብቻ ካዩ ፣ በጣም ትንሽ ወይም በጣም ብዙ ብሊች እየተጠቀሙ ይሆናል።
- ተንሸራታቹን ለመጠበቅ ከእንጨት የተሠሩ ክላጆችን መጠቀም ይችላሉ።
ማስጠንቀቂያ
- አሴቶን እና ኤታኖል ተቀጣጣይ ንጥረ ነገሮች ናቸው። አሴቶን ዘይቱን ከእጅዎ ያስወግደዋል ፣ ቆዳዎ ሌሎች ኬሚካሎችን ለመምጠጥ ቀላል ያደርገዋል። ጓንት ያድርጉ እና በጥንቃቄ ይጠቀሙባቸው።
- የግራምን እድፍ ወይም የእቃ መያዣውን ከማጥለቅዎ በፊት ቅባቱ እንዲደርቅ አይፍቀዱ።
ምንድን ነው የሚፈልጉት
- የአውታረ መረብ ናሙና
- የመስታወት ተንሸራታች
- ፒፕሴት
- አነስተኛ የእሳት ምንጭ ፣ ወይም ተንሸራታች ማሞቂያ ፣ ወይም ሚታኖል
- ውሃ
- ክሪስታል ቫዮሌት
- አዮዲን
- እንደ አልኮሆል ወይም አሴቶን ያሉ የቀለም ማጽጃ
- Safranin
